福尔马林固定石蜡包埋(Formalin Fixed Paraffin Embedded,FFPE)是医学病理研究中保存临床组织样本的标准方法,利用该方法存档着大量生物样品。FFPE 样本承载着众多疾病学信息,但因其 RNA 质量下降,转录本降解等原因,针对 FFPE 进行单细胞水平的研究一直困难重重。值得高兴的是,单细胞基因表达 Flex 技术(即单细胞 Fixed RNA)的出现解决了 FFPE 样本单细胞水平研究的难题,该技术使用探针杂交的方式,实现了在单细胞水平解锁大量储存在医院以及生物样本库中 FFPE 样本的宝贵信息。
单细胞基因表达 Flex 技术利用包含上万个特异性探针的专用芯片来实现靶基因捕获。在 FFPE 样本经手动/自动化脱蜡解离后,芯片上带 Probe Barcode 的探针与获得的细胞悬液进行杂交,探针上的 LHS 及 RHS 部分可直接捕获靶基因,再通过 10x Genomics Chromium X 系统微流控通道与含有 10x Barcode 的凝胶珠(Gel beads)结合,被油滴包裹形成油包水结构的微体系(GEMs),从而实现在单细胞水平上获取FFPE样本中保存的珍贵信息。
图1 FFPE 样本工作流程示意图
目前,FFPE 样本已经过多次实验,选择 15 个不同类型人类组织 FFPE 样本(包括人类肺癌、乳腺癌、睾丸FFPE样本等),通过单细胞基因表达 Flex 技术进行单细胞转录组测序分析,最终获得的基因数最高约 1500 个,完全可以满足后续细胞图谱及差异表达等分析要求。具体样本类型、保存时间、样本量、解离得到的细胞数等结果表现如下:
图2 人体组织 FFPE 样本数据结果展示
图3 浸润性导管癌 FFPE 切片检测得到的细胞类型、基因中位数等分析结果
作为单细胞测序技术服务领域的佼佼者,博奥生物旗下博奥晶典在 2022 年取得了突出的成绩。我们推出了单细胞基因表达 Flex(Fixed RNA)技术服务,解决样本的存储和运输难题,实现了 FFPE 样本开展单细胞测序的可能;引进了单细胞 CRISPR 筛选技术,通过分析数百个不同的 CRISPR 扰动,了解某些基因的定量表达如何影响复杂的细胞表型和进程。更加值得称赞的是,博奥晶典还补充了国有单细胞平台,自研了组织提核试剂盒,并强势推出 CellScope 自有生信分析云平台,从实验和分析两个层面保障单细胞成果稳定产出。2022年博奥晶典已经在单细胞及空间组学领域累计支持发文 130 余篇,总影响因子超过 2500 分,一年内支持登顶三篇 Nature 期刊重磅文章!博奥晶典在单细胞方面所做开拓性的产品布局为您的单细胞项目保驾护航,所取得的优异成绩让我们有充足的信心进一步服务好广大客户。
博奥晶典单细胞空间测序平台
博奥晶典支持单细胞测序文章分别发表在 Nature、Cell、Cancer Discovery、Circulation、Cell Stem Cell、Journal of Hepatology、Cell Research、Nature Immunology、Nature Cell Biology、GUT、Advanced Science 等期刊,应用领域涉及细胞图谱绘制、类器官、生殖发育、干细胞、血管老化、血管异质性、肿瘤异质性、肿瘤免疫治疗、疾病机制研究等。
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